Чем временный препарат отличается от постоянного

Создание препаратов

Как мы уже говорили, в микроскопы можно смотреть прозрачные и непрозрачные объекты (если микроскоп оборудован верхней подсветкой, либо при наличии яркого внешнего освещения). Однако маленькое рабочее расстояние объективов большой кратности делает невозможным исследование ряда объектов в отраженном свете, и поэтому для исследований большинства образцов необходимо готовить специальные микропрепараты.

Для приготовления тонких срезов объектов используется специальный прибор, который называется – микротом . При помощи микротома мы можем делать тонкие прозрачные срезы, которые уже можем наблюдать в проходящем свете.

Для того чтобы получить необходимый срез, достаточно осторожно положить наш предмет в прорезь под ручку микротома, которую далее нужно лишь поворачивать, срезая тонкий слой. Полученный тонкий срез следует разместить на специальное продолговатое предметное стеклышко, перед этим подготовив его.

На чистое предметное стекло с помощь пипетки капните пару капель воды (если препарат растворим, как соль или сахар, то можно использовать сухое стекло), жидкость хорошо проводит свет и позволяет расправить приготовленный нами материал. Подготовленный предмет разместите примерно посередине стекла и накройте покровным стеклом, избегая попадания воздуха. Только что мы с Вами сделали временный препарат .

Есть еще один интересный аксессуар для проведения исследований – чашка Петри . Для чего она нужна? Данная лабораторная посуда в форме небольшого плоского цилиндра, который закрывается подобной крышкой, потребуется нам для изучения крупных препаратов.

Препарат «висячая капля» . Однако как быть, если мы хотим рассмотреть препарат «висячая капля»? Давайте для начала разберемся, что это такое. Данный препарат служит для микроскопии живых организмов. Вы можете рассматривать живые бактерии прямо при физиологических условиях роста. Для этого нужно взять предметное стекло с углублением и капнуть на него изучаемую жидкость, затем аккуратно перевернуть и положить на предметное стекло, о котором мы упоминали раньше.

Постоянные препараты . Только что мы научились работать с временными препаратами, но так же есть и постоянные. Последний, как вы уже, наверное, догадались, можно хранить долгое время, поместив его, так же как и временный на предметном стекле. Отличие состоит в том, что края покровного стекла следует закрепить воском, специальной смолой, либо другим веществом, чтобы сохранить герметичность между стеклышками. Вы можете создавать свои собственные постоянные препараты и хранить их длительное время.

Часто микроскопы комплектуются уже готовыми наборами постоянных препаратов, а так же такие наборы продаются отдельно. Часто можно приобрести уже готовые наборы, в которых число препаратов доходит до 100 штук!

Мир вокруг нас удивительно многообразен и многолик. Каждому человеку интересно узнать, как устроено все то, что его окружает, и многие из нас стремятся приоткрыть завесу тайны микромира, который нельзя увидеть лицам неподготовленным и невооруженным специальным оборудованием.

Почти за 450 лет своего существования микроскопы прошли путь от простого соединения нескольких увеличительных линз, позволявших увидеть микромир в капле воды, до сложных механизмов, благодаря которым можно разглядеть структуру крупных молекул.

Техника изготовления временных микропрепаратов

Вопросы к экзамену

1. История и методы систематики растений. Искусственные, естественные и филогенетические системы растений.

2. Общая характеристика высших растений. Отличия высших растений от низших.

3. Эволюция гаметангиев и жизненных циклов высших растений. Биологическое и эволюционное значение разноспоровости.

4. Учение о стеле. Эволюция стелярной организации тела спорофита.

5. Общая характеристика папоротниковидных

6. Cистематика папоротниковидных.

7. Характеристика равноспоровых папоротниковидных.

8. Жизненный цикл равноспоровых папоротников.

9. Характеристика разноспоровых папоротников.

10. Жизненный цикл разноспоровых папоротников.

11. Общая характеристика голосеменных.

12. Теория происхождения интегумента, формирование и строение семязачатка голосеменных.

13. Семязачаток. Его происхождение, строение, классификация.

14. Мегаспорогенез и развитие женского гаметофита семенных растений.

15. Жизненный цикл голосеменных на примере сосны. Его особенности в разных систематических группах голосеменных.

16. Характеристика классов Семенные папоротники, Саговниковые и Гинкговые.

17. Характеристика классов Беннеттитовые и Гнетовые

18. Общая характеристика и происхождение покрытосеменных. Отличия однодольных от двудольных растений.

19. Характеристика класса Хвойные и его систематических групп..

20. Микроспорогенез и развитие мужского гаметофита семенных растений. Строение и эволюция пыльцевых зерен.

21. Этологические и генетические факторы и место происхождения цветковых растений.

22. Жизненный цикл покрытосеменных.

23. Характеристика подкласса Магнолиид: порядки Magnoliales, Laurales.

24. Характеристика подкласса Магнолиид: порядки Piperales, Rafflesiales, Nymphaeales.

25. Характеристика подкласса Ранункулид: порядки Ranunculales,Paeoniales.

26. Характеристика подкласса Ранункулид: порядки Nelumbonales, Papaverales.

27. Характеристика подкласса Кариофилид: порядки Caryophyllales, Polygonales, Nepenthales

28. .Характеристика подкласса Гамамелидид: порядки Trochodendrales, Casuarinales, Fagales

29. Характеристика подкласса Гамамелидид: порядки Betulales, Juglandales.

30. Характеристика подкласса Диллениид: порядки Theales, Ericales, Primulales.

31. Характеристика подкласса Диллениид: порядки Violales, Cucurbitales.

Читать еще:  Ощущение жара во рту причины

32. Характеристика подкласса Диллениид: порядки Malvales, Brassicales

33. Характеристика подкласса Диллениид: порядки Urticales, Euphorbiales.

34. Характеристика подкласса Розид: порядки Rоsales, Myrtales.

35. Характеристика подкласса Розид: порядки Ruthales, Fabales.

36. Характеристика подкласса Ламид: порядки Solanales, Boraginales.

37. Характеристика подкласса Ламид: порядки Scrophulariales, Lamiales.

38. Характеристика подкласса Астерид: порядки Asterales, Apiales.

39. Характеристика подкласса Арецид: порядки: порядок Arecales.

40. Характеристика подкласса Частуховых: порядки Arales, Hydrocharitales и Alismatales

41. Характеристика подкласса Лилейных: порядки Liliales, Iridales

42. Характеристика подкласса Лилейных: порядок Orchidales. Орхидные – вершина эволюции насекомоопыляемых представителей подкласса.

43. Характеристика подкласса Коммелиновые: порядки Cyperales, Typhales

44. Характеристика подкласса Коммелиновые: порядок Poales. Злаки – наиболее совершенные ветроопыляемые лилииды, их роль в природе и в жизни человека.

Для изучения растительных объектов с помощью светового микроскопа необходимо приготовить микропрепарат. Микропрепараты, не предназначенные для длительного хранения, называются временными. Изучаемый объект помещают на предметное стекло в каплю воды, глицерина, раствора, реактива или красителя и накрывают покровным стеклом. Такие препараты можно хранить в течение нескольких дней, поместив во влажную атмосферу.

Если объекты помещают в бальзам, глицерин с желатиной или целлоидин, препараты сохраняются годами и называются постоянными.

Некоторые растения или их органы (водоросли, споры, пыльца и др.) можно рассматривать под микроскопом целиком, без предварительного изготовления срезов. Такие препараты называются тотальными.

Однако число объектов, которые можно изучать на тотальных микропрепаратах невелико. Чаще приходится делать срезы органов, подлежащих изучению. Срезы изготавливают из свежих или фиксированных частей растений. Обычно для фиксации употребляют растворы спирта или формалина. Сделанные срезы должны быть очень тонкими и прозрачными. Различают следующие виды срезов: поперечный и продольный ( радиальный, тангентальный, парадермальный) (рис. 1).

Поперечный срез проходит перпендикулярно оси органа и позволяет изучить строение органа в поперечном сечении.

Продольный радиальный срез проходит по радиусу оси органа и дает возможность изучить строение органа в продольном сечении.

Продольный тангентальный срез проходит перпендикулярно радиусу цилиндрической структуры, например, корня или стебля; в случае вторичных ксилемы и флоэмы проходит под прямым углом к сердцевинным лучам.

Парадермальный срез (греч. пара + дерма – кожа) – сечение, параллельное поверхности плоской структуры, например, листа (срез эпидермы листа).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Сдача сессии и защита диплома – страшная бессонница, которая потом кажется страшным сном. 8846 – | 7179 – или читать все.

95.47.253.202 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Изготовление постоянных микропрепаратов

Мы часто получаем письма, подобные тому, выдержки из которого приведены ниже.

«. Зарплата маленькая, денег у школы нет на абсолютно необходимые вещи. Ученики не могут приобрести учебники. Компьютеры были и остаются мечтой совершенно недосягаемой. И в лучшие-то времена пособий не хватало, что уж теперь говорить. Газеты объединения «Первое сентября» – единственный на сегодня относительно доступный по цене источник, из которого можно получить свежую информацию. Подскажите, что делать, если нет возможности. » – далее идет перечисление, чего именно нет.

Мы бываем очень рады, когда удается кому-то помочь. С нами сотрудничают квалифицированные специалисты в различных областях, способные дать детальные, подробные консультации по самым неожиданным вопросам. Но нам представляется особенно ценным, когда вы, дорогие читатели, делитесь опытом, помогаете друг другу решить какие-то наболевшие проблемы.

В редакции встретились два письма. К.С. В-ва пишет: «. Работаю биологом в школе уже несколько лет. Пользуюсь в основном наследством, оставшимся от застойных времен, которые все так дружно ругали. Я не жалуюсь, в школе даже микроскопы сохранились. Но как ни стараемся мы, микропрепараты нет-нет, да и бьются или давятся неопытными руками. Когда возможно, делаем временные, но это требует, простите за невольный каламбур, времени, которого на наш предмет и так не много. Может, подскажете какой-нибудь способ изготовления постоянных препаратов на основе подручных материалов? Ни о канадском, ни о пихтовом бальзаме я не заикаюсь. »

Ответ на просьбу мы нашли в письме нашей постоянной читательницы А.Н. Сергеевой. Вот что она пишет.

«Перед учителями биологии и руководителями кружков рано или поздно встает задача изготовить учебный микропрепарат. Нам хотелось подобрать вещество, способное надолго зафиксировать биологический объект, сделать эту процедуру простой и доступной. Известные бальзамы (смолы-фиксаторы) никогда не относились к легкодоступным веществам, особенно в удалении от крупных городов. Кроме того, где-то мы слышали, что вещества эти не безвредны. И, наконец, сам процесс их использования, который мы когда-то изучали в институте, был довольно непрост. Решение подсказал случай.

Читать еще:  Больно ли носить брекеты после установки

Как в любой небольшой школе, приходилось совмещать различные виды учебно-образовательной деятельности, часто смежные, а то и далекие от основного предмета. Но особенно привлекало что-нибудь такое, что все-таки имело отношение к природе, например составление композиций и изготовление поделок из природных материалов. Одной из непременных принадлежностей такой работы были различные виды клея.

Всем, наверное, известно, что, к сожалению, с лаками и клеями надо работать очень аккуратно. Дело не только в том, что будет испорчена, например, одежда, всегда можно подобрать такой костюм, который не очень жалко. Самое обидное то, что пролитый клей или лак обычно оставляет незаметные поначалу пятна на детских работах. Со временем эти пятна желтеют, буреют и безнадежно портят изделия. Приходится их реставрировать или убирать, а то и выбрасывать, что не радует никого.

На курсах повышения квалификации, кажется, в 1975 или даже 1973 г., нам показывали приемы работы с обычной соломкой. Оказалось, что ее очень легко выгладить тупой стороной ножа или любым подходящим предметом в красивые блестящие полоски, которые можно затем клеить на бумагу или ткань, составляя целые картины. (Мы для простоты склеивали из полосок что-то похожее на древесные листья, подбирая соломку других цветов для жилок и черешков.) Тогда же руководитель этих занятий объяснил нам, что для склеивания нужно пользоваться клеем ПВА (поливинилацетатным), поскольку его капли образуют прозрачную, долго сохраняющую эластичность пленку, а главное – не портят бумагу, в отличие, например, от силикатного клея.

Как мы позже опытным путем выяснили, этим клеем ПВА можно успешно пользоваться как заменителем лака, покрывая им, например, раскрашенные самодельные брошки из необожженной глины. После застывания клей, видимо, полимеризуется и даже приобретает изрядную водостойкость. Случайные брызги воды работам с таким покрытием не страшны.

Использовать клей ПВА для изготовления препарата мы попробовали в 1985 г. Важно, чтобы препарат был влажный, хорошо смоченный, а клей – свежий и чуть разбавленный чистой холодной кипяченой водой до нужной концентрации (клей представляет собою эмульсию и легко разводится). После нескольких проб и ошибок нужную концентрацию вы сможете составлять и определять без труда.

Дальше все просто. На чистое предметное стекло нанесите каплю воды – кипяченой или, если вы дружите с учителем химии, дистиллированной. Воду надо аккуратно удалить чистой, не оставляющей волосков тканью или фильтровальной бумагой так, чтобы стекло было чуть влажным. Это, как и влажность образца, способствует равномерному (без пузырьков) смачиванию. На подготовленную поверхность нужно нанести небольшую каплю заранее приготовленного клея ПВА так, чтобы не появились пузырьки воздуха. Они иногда и не мешают, но внешний вид препарата портят. В эту каплю аккуратно переносят заранее подготовленный срез или образец, например, предварительно умерщвленную горячей водой дафнию (умерщвление преследует сразу две цели – я не хочу воспитывать в детях бесцельную жестокость, с другой стороны – неподвижное животное при наличии элементарных навыков работы с препаровальной иглой можно расположить в капле клея так, чтобы впоследствии его было удобно рассматривать). Затем плавным наклонным движением (сначала капли касается один край стекла, как при изготовлении временного препарата) надо сверху положить покровное стекло, также чистое и слегка влажное. Слой клея между стеклами должен быть как можно более тонким.

Если что-то не удалось, а образец ценный и достаточно крупный, почти всегда, в отличие от смол, есть возможность его отмыть простой водой и процедуру повторить. Излишки клея аккуратно смываются тонкой струйкой воды; нужно следить, чтобы она не затекала между стеклами. Покровное стекло необходимо придерживать. Чуть мутноватые остатки воды можно аккуратно удалить фильтровальной бумагой, а лучше – полоской тонкой ткани без ворса (если ее сразу тщательно сполоснуть, ткань можно использовать многократно – клей, пока не высох, отстирывается начисто).

Готовые препараты надо разложить в теплом сухом месте. Индикатором готовности препарата служит его прозрачность. В зависимости от очень многих факторов высыхание до прозрачного состояния продолжается от одной до четырех недель. Бывает, что слишком толстый слой клея или клей, загрязненный примесями, полностью прозрачным не становится – это несколько ухудшает изображение, но благодаря небольшой глубине резкости микроскопа даже такие препараты доступны для изучения.

Первым препаратам, изготовленным таким образом, уже более 15 лет. Они до сих пор вполне пригодны».

Мы не гарантируем, что предложенный метод можно применять для изготовления любых препаратов, поскольку некоторые из них требуют окрашивания, а красители могут взаимодействовать с клеем. Однако мы не сомневаемся, что опыт преподавателя может оказаться полезным во многих случаях.

Читать еще:  Металлический привкус во рту и изжога

Чем временный препарат отличается от постоянного

П.2.4.2. Постоянные препараты

1. Фиксация. Это сохранение материала в состоянии, близком к естественному. Для фиксации необходимо быстро умертвить ткани. Это лучше достигается при работе с небольшими кусочками живого материала. Используемое для этого вещество называется фиксатором. Быстрой фиксацией обеспечивается сохранение изначальной структуры объекта, причем ткани уплотняются настолько, что с них можно готовить тонкие срезы.

2. Обезвоживание. Обезвоживание проводится при подготовке материала к заливке (см. ниже п. 4) или для заключения его в соответствующую среду (см. ниже п. 7), которая не смешивается с водой. Воду необходимо удалить также потому, что иначе со временем препарат будет разрушен бактериями. Для того чтобы сохранить ультраструктуру, обезвоживание надо проводить постепенно, обрабатывая материал рядом водных растворов этанола или пропанона (ацетона) со все возрастающей концентрацией, и закончить обработку “абсолютным” (чистым) этанолом или пропаноном.

3. Просветление. Некоторые из общеупотребимых сред для заливки и заключения не смешиваются со спиртом. Поэтому его надо постепенно замещать средой (просветляющее вещество), с которой заливочная среда смешивается, например ксилолом. Это приводит также к тому, что материал становится прозрачным.

4. Заливка. Для того чтобы с помощью микротома получить очень тонкий срез, необходимо, чтобы материал был залит в определенную среду. При приготовлении препаратов для световой микроскопии объекты заливают в парафин, которому затем дают застыть. При приготовлении препаратов для электронной микроскопии необходимо использовать более твердые вещества (пластмассы или смолы), потому что необходимые в этом случае более тонкие срезы требуют для своего приготовления более плотные вещества.

5. Изготовление срезов. Как правило, толщина кусочков материала слишком велика, чтобы сквозь них могло пройти достаточное для исследования под микроскопом количество света. Обычно приходится срезать очень тонкий слой исследуемого материала, т. е. готовить срезы. Срезы можно делать бритвой или на микротоме. Вручную срезы готовятся с помощью остро отточенной бритвы. Для работы на обычном микроскопе толщина среза должна равняться 8-12 мкм. Ткань следует закрепить между двумя кусочками сердцевины бузины. Бритву смачивают жидкостью, в которой хранилась ткань; срез делают через бузину и ткань, причем бритву держат горизонтально и двигают ее к себе медленным скользящим движением, направленным чуть вкось. Быстро сделав несколько срезов, следует выбрать из них самый тонкий, содержащий характерные ткани.

Срез с ткани, залитой в ту или иную среду, можно сделать на микротоме. Для светового микроскопа срезы толщиной в несколько микрометров можно сделать с залитой в парафин ткани с помощью специального стального ножа. На ультратоме изготавливают чрезвычайно тонкие срезы (20-100 нм) для электронного микроскопа. Для этого необходим алмазный или стеклянный нож.

Срезы для светового микроскопа можно приготовить, не заливая материал в среду; для этого используют замораживающий микротом. В процессе приготовления замороженного среза образец сохраняется в замороженном и, следовательно, в твердом состоянии.

6. Окрашивание. Как правило, биологические структуры на препаратах прозрачны, поэтому для получения контраста между ними приходится прибегать к различным средствам. Самым распространенным является окрашивание. Некоторые красители, используемые в световой микроскопии, перечислены в табл. П.2.2.


Таблица П.2.2. Красители, применяемые для окраски растительных и животных тканей

Определенные красители при использовании их в низких концентрациях не токсичны для живых тканей и поэтому могут применяться для окрашивания живых организмов. Они называются прижизненными (витальными) красителями. К ним относятся такие, как метиленовый синий и нейтральный красный.

При окрашивании парафиновых срезов парафин удаляют с помощью растворителя, а срез частично обводняют перед окрашиванием.

7. Заключение. Полностью окрашенные срезы заключают на предметном стекле в специальную среду, например в канадский бальзам или эупарол, которая не пропускает воздух и способна неограниченно долго сохранять срез. Заключенный в среду срез покрывают покровным стеклом. Последовательность описанных выше действий является типичной при приготовлении тонких срезов для постоянных препаратов. Однако часто в порядок действий вносят два следующих изменения:

а) если срез сырого материала готовится вручную, то сначала делают срез, а потом фиксируют его;

б) окрашивать можно после фиксации или же в процессе обезвоживания на какой-либо ее стадии.

Например, красителем, растворенным в 50% этаноле, можно окрасить срез после его дегидратации в 50% этаноле.

Описанная процедура приготовления препаратов в основном сходна как для светового, так и для электронного микроскопов, хотя существуют некоторые различия в деталях (они отмечены в табл. П.2.3).


Таблица П.2.3. Различия в подготовке материалов для светового и электронного микроскопов

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector